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農藥登記急性毒性試驗方法_續

作者: 來源: 日期:2019/2/27 15:21:35 人氣:716

上篇農藥登記急性毒性試驗方法小編簡述了急性經皮、急性經口和急性吸入試驗方法,本文主要簡述急性眼刺激性/腐蝕性、皮膚刺激性、皮膚變態反應試驗。

眼刺激性/腐蝕性試驗

Eye irritation/corrosion test

1. 定義

眼睛刺激性 eye irritation

眼睛表面接觸受試物后發生的可逆性炎性變化,在21d內完全恢復。

眼睛腐蝕性 eye corrosion

眼睛表面接觸受試物后發生的不可逆性組織損傷,在21d內不能完全恢復。

2. 試驗目的

評估受試物毒性,對哺乳動物的眼睛刺激或腐蝕的程度的分級提供依據;

確定受試物對哺乳動物是否有刺激作用或腐蝕作用;

為其他毒理學試驗劑量的選擇提供依據;

便于標簽的管理。

3. 試驗方法

受試物以一次劑量滴入每只實驗動物的一側眼睛結膜囊內,以未作處理的另一側眼睛作為自身對照。在規定的時間間隔內,觀察動物眼睛的刺激和腐蝕作用程度并評分,以此評價受試物對眼睛的刺激作用,觀察期限應能足以評價刺激效應的可逆性和不可逆性。

受試物

液體受試物一般不需要稀釋,直接使用原液,染毒量為0.1mL。固態受試物一般將其研磨成細粉狀,過200目篩,染毒劑量為0.1mL。氣溶膠產品需撐開兔眼,在眼正前方10cm處,對準兔眼按壓氣溶膠噴霧1s。

實驗動物

首選體重為2.0kg~3.0kg的健康成年白色家兔。

試驗操作

輕輕拉開家兔一側眼睛的下眼瞼,將受試物0.1mL(或100mg)滴入結囊膜中,使上、下眼瞼被動閉合1s,以防止受試物丟失。另一側眼睛不處理作自身對照。

71h刺激反應不消失,應另選用3只家兔進行沖洗效果試驗,即給家兔眼滴入(放入)受試物后30s,用足量、流動較快但又不會引起動物眼睛損傷的水流沖洗至少30s。

4. 觀察指標

在滴入(放入)受試物后1h、24h、48h、72h以及第4天和第7天對動物眼睛進行檢查。對角膜、虹膜、結膜以及其他損害效應記錄并報告。

皮膚刺激性/腐蝕性試驗

Dermal irritation/corrosion test

1. 定義

皮膚刺激性 dermal irritation

皮膚涂覆受試物后局部發生的可逆性炎性變化。

皮膚腐蝕性 dermal corrosion

皮膚涂覆受試物后局部發生的不可逆性組織損傷。

2. 試驗目的

評估受試物毒性,對哺乳動物的皮膚局部刺激或腐蝕的程度的分級提供依據;

確定受試物對哺乳動物皮膚局部是否有刺激作用或腐蝕作用;

為其他毒理學試驗劑量的選擇提供依據;

便于標簽的管理。

3. 試驗方法

將受試物一次涂覆于受試動物的皮膚上,采用自身對照,在規定的時間間隔內,觀察動物皮膚局部刺激作用的程度并進行評分,以此評價受試物對皮膚的刺激作用,觀察期限應足以評價該作用的可逆性或不可逆性。

受試物

液體受試物一般不需要稀釋,直接使用原液。固態受試物一般將其研磨成細粉狀,并用水或其他無刺激性溶劑充分潤濕。

實驗動物

首選體重為2.0kg~3.0kg的健康、成年、皮膚無異常和無損傷的白色家兔。

試驗操作

試驗前約24h,將實驗動物背部脊柱兩側被毛去除,不可損傷表皮,去毛范圍至少各為6cm2。取受試物0.5mL(g)涂在一側去毛皮膚上,用二層紗布和一層玻璃紙或類似物覆蓋,再用無刺激性膠布和繃帶加以固定。另一側皮膚作為對照,除不加受試物外,其他處理和實驗動物相同。采用封閉試驗,敷用時間約為4h。然后用清水或無刺激性溶劑清洗受試區皮膚。

4. 觀察指標

于清除受試物后的1h、24h、48h和72h觀察涂抹部位皮膚反應,一般不超過14d。

皮膚變態反應(致敏)試驗

Skin sensitization test

1. 定義

皮膚刺激 Skin sensitization

測試動物在反復接觸受試物后,皮膚對一種物質產生的免疫原性皮膚反應。

2. 試驗目的

評估受試物毒性,對哺乳動物的皮膚變態的程度的分級提供依據;

確定受試物對哺乳動物是否可引起皮膚變態反應;

為其他毒理學試驗劑量的選擇提供依據;

便于標簽的管理。

3. 試驗方法

局部封閉涂皮試驗(Buehler test,BT)和豚鼠最大值試驗(Guinea pig maximization test,GPMT)是實驗動物通過多次皮膚涂抹(誘導接觸)或皮內注射受試物10d~14d(誘導階段)后,給予激發劑量的受試物,觀察實驗動物,并與對照動物比較對激發接觸受試物的皮膚反應強度。

實驗動物

選用健康、成年雌性或雄性豚鼠。

試驗操作

局部封閉涂皮試驗(Buehler test,BT)

誘導接觸:試驗前約24h,將豚鼠背部左側去毛,去毛范圍為4cm2~6cm2。將受試物約0.2mL(g)涂在實驗動物去毛區皮膚上,以二層紗布和一層玻璃紙覆蓋,再以無刺激膠布封閉固定6h。第7天和第14天以同樣方法重復一次。激發接觸:末次誘導后14d,將約0.2mL(g)的受試物涂魚豚鼠背部右側2cm×2cm去毛區(接觸前24h去毛),然后用二層紗布和一層玻璃紙覆蓋,再以無刺激膠布固定6h。試驗組動物至少20只,對照組至少10只。

豚鼠最大值試驗(Guinea pig maximization test,GPMT)

誘導接觸(第0天)受試物組:將頸背部去毛區(2cm×4cm)中線兩側劃定三個對稱點,每點皮內注射0.1mL下述溶液:

第1點 1:1FCA/水或生理鹽水的混合物;

第2點 耐受濃度的受試物;

第3點 1:1FCA/水或生理鹽水配制的受試物,濃度與第2點相同。

對照組:注射部位同受試物組,每點皮內注射0.1mL下述溶液;

第1點 1:1FCA/水或生理鹽水的混合物;

第2點 未稀釋的溶液

第3點 1:1FCA/水或生理鹽水配制的濃度為500g/L的溶液。

誘導接觸(第7天)將涂有0.5g(mL)受試物的2cm×4cm濾紙敷貼在上述再次去毛的注射部位,然后用兩層紗布,一層玻璃紙覆蓋,無刺激膠布封閉固定48h。對照組和試驗組動物于第二次誘導接觸前24h在注射部位涂抹10%十二烷基硫酸鈉(SLS)0.5mL。對照組僅用溶劑作誘導處理。將豚鼠軀干部去毛,用涂有0.5g(mL)受試物的2cm×2cm濾紙敷貼在去毛區。激發接觸(第21天)將豚鼠軀干部去毛,用涂有0.5g(mL)受試物的2cm×2cm濾紙敷貼在去毛區,然后再用兩層紗布,一層玻璃紙覆蓋,無刺激膠布封閉固定24h。對照組作同樣處理。試驗組至少10只。對照組至少5只。

4. 觀察指標

激發接觸后24h和48h觀察右側皮膚反應,按下表評價。

1 變態反應試驗(局部封閉涂皮法)皮膚反應評分

皮膚反應

評分

紅斑和焦痂形成

 

無紅斑

0

輕微紅斑

1

明顯紅斑

2

中度至重度紅斑

3

嚴重紅斑至輕微焦痂形成

4

 

 

水腫形成

 

無水腫

0

輕微水腫(勉強可見)

1

中度水腫(皮膚隆起輪廓清楚)

2

重度水腫(皮膚隆起約1mm或超過1mm)

3

最高積分

7

 

2 變態反應試驗(豚鼠最大值法)皮膚反應評分

皮膚反應

評分

未見皮膚反應

0

散在或小塊紅斑

1

中度紅斑或融合紅斑

2

重度紅斑和水腫

3


當然,農藥登記申請資料中登記試驗資料除了毒理學中本文介紹的六項急性毒性,還包括產品化學、藥效、殘留和環境影響等試驗以及評估報告。


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